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免疫熒光(Immunofluorescence，IF)技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術，將抗體分子與一些示蹤標記結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位和定量。免疫熒光技術可以對目的蛋白在細胞中的定位提供更高的分辨率、更高的靈敏度，是目前在細胞水平進行蛋白量(定性為主)及蛋白定位分析最常用的方法。
載基可將玻璃切片上的所有信息進行采集形成高分辨率的數字切片，防止熒光淬滅；可任意倍數進行觀察；可滿足臨床、科研、教學等多種用途。
? 載基優(yōu)勢
客戶提供：新鮮樣本/固定后的樣本/包埋后的蠟塊/切片和一抗，新鮮樣本干冰運輸；固定液樣本、蠟塊常溫運輸；石蠟切片、組織芯片冰袋運輸；冰凍切片冰袋+干冰運輸；抗體冰袋運輸；細胞爬片4%多聚甲醛固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，冰袋運輸。
? 實驗步驟
1.抗原修復：將 EDTA 抗原修復液（PH9.0）用蒸餾水稀釋 50 倍，并加熱至沸騰。將脫蠟水化后的切片置于耐高溫染色架上，放入不銹鋼鍋中；將功率調至最小(處于保溫狀態(tài))，蓋上鍋蓋，繼續(xù)加熱 20 分鐘后，離開熱源，自然冷卻 10 分鐘；用自來水沖淋不銹鋼鍋外壁使之冷卻，待鍋中液體冷卻至室溫后取出切片;蒸餾水沖洗 3 分鐘 x3 次；用 PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次；
2.滅活：除去 PBS，在切片上滴加內源性過氧化物酶阻斷劑，室溫下孵育 10 分鐘，用PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次；
3.封閉：除去 PBS，在切片上滴加 5%BSA 封閉液室溫下孵育 30min；
4.加一抗：輕輕甩掉封閉液，切片上滴加第一抗體，4 度孵育過夜（濕盒內加少量水防止抗體蒸發(fā)）；
5.加二抗：取出濕盒，復溫 40min 左右，用 PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次，除去 PBS，切片上滴加與一抗相應種屬的熒光二抗，室溫下避光孵育 1h，PBS 沖洗 3x3 分鐘；
6.DAPI 復染細胞核：除去 PBS,切片稍甩干后在圈內滴加 DAPI 染液，避光室溫孵育10min，PBS 沖洗 3x3 分鐘
7.淬滅組織自發(fā)熒光：除去 PBS，在圈內加入自發(fā)熒光淬滅劑 避光室溫孵育 5min，流水沖洗 10min；
8.封片：切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片；
9.鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI 紫外激發(fā)波長 330-380nm，發(fā)射波長 420nm，發(fā)藍光；FITC 激發(fā)波長 465-495nm，發(fā)射波長 515-555 nm，發(fā)綠光；CY3 激發(fā)波長 510-560，發(fā)射波長 590nm，發(fā)紅光。
10.結果觀察：DAPI 染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的紅光或綠光。
載基生物
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